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基因编辑关键步骤单克隆筛选,如何提速?
2024-07-18 10:58  点击:7
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镰状细胞病(sickle cell disease,SCD)是一组由血红蛋白β亚单位基因(HBB)的异常变异引起的单基因遗传性血液疾病,异常的血细胞在血管中黏附堵塞,导致血液流动受阻,引起一系列血栓、贫血、器官受损等严重症状。据统计,全球每年约有300,000例患者正受此困扰。

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迄今为止,SCD治疗选择非常有限,干细胞移植被认为是治愈SCD的有望办法,然而移植手术需要捐献者匹配且存在排斥风险。近日,美国FDA批准了两种针对镰状细胞病的新型基因疗法,即Vertex和CRISPR联合的Casgevy和蓝鸟生物的Lyfgenia。Casgevy是获批上市的CRISPR基因编辑的基因疗法, 且1月16日FDA已批准用于治疗依赖输血型β地中海贫血(TDT)患者。

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人血红蛋白由2对珠蛋白组成。珠蛋白有四种,141个氨基酸残基的α珠蛋白和含146个氨基酸残基的非α珠蛋白(β、γ及δ型)。胎儿血红蛋白(HbF)由一对α珠蛋白和一对γ珠蛋白组成(α2γ2),在出生后6个月内降至1%,此后变为HbA,由一对α珠蛋白和一对β珠蛋白组成(α2β2)。

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Casgevy利用CRISPR编辑技术对BCL11A基因敲除,使得造血干细胞中的γ珠蛋白表达上调,β珠蛋白的表达下降,从而产生胎儿血红蛋白(HbF)。胎儿血红蛋白是一种健康,可以正常携带氧气的血红蛋白。胎儿血红蛋白水平升高可防止红细胞镰状病变。

在使用CRISPR基因编辑技术操作后,通常会使用单细胞克隆来获取含有特定基因编辑的细胞群体。这样可以确保所有细胞都具有相同的基因改变,从而减少实验中的变异性。单细胞分离仪Pala可实现基因编辑后的细胞分离并分选至孔板中,筛选出成功敲除目标基因的克隆。













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全自动柔性单细胞分离仪Pala

基因编辑筛选单克隆解决方案

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•极低的流体压力(<2psi),确保细胞的活性与功能

•单细胞分离至96孔板耗时<1min, 分离至384孔板耗时<6min

•荧光分选:405nm,488nm,561nm

•适用样本细胞浓度范围广100 cells/ml至1.5×108cells/ml

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